La levadura metilotrófica, Pichia pastoris, se ha convertido en un sistema muy exitoso para la producción de proteínas. Un método sencillo y directo para la selección de clones de alta producción pueden mejorar dramáticamente el proceso de producción, junto con la disminución significativa de los costes de producción
En este artículo presentamos un método visual para una rápida selección de clones de alta producción, basado en el sistema reportero mananasa. Hemos demostrado que era posible usar la actividad mananasa como una medida del nivel de expresión de la proteína de interés. Clones de destino de alta producción de la proteína fueron seleccionados de forma directa en función del tamaño de los agujeros de la hidrólisis de la placa seleccionada. A modo de ejemplo, el gen targer (ELP-hal18) se expresó y se purifica en el Pichia pastoris utilizando esta tecnología.
Conclusiones
Estamos proponiendo una nueva metodología para la obtención de clones de alta producción de proteínas de interés, basado en el sistema reportero mananasa, este sistema también podría ser posible adaptar a otros microorganismos, tales como Saccharomy. Cervesae,
Tomado de:
A visual method for direct selection of high-producing Pichia pastoris clones
Fan Hu , Xin Li , Jie Lu , Pei Hong Mao , Xiang Jin , Ben Rao , Peng Zheng , Yu Lin Zhou , Sheng Yi Liu , Tao Ke , Xiang Dong Ma and Li Xin Ma
BMC Biotechnology 2011, 11:23doi:10.1186/1472-6750-11-23
Published: 21 March 2011
BMC Biotechnology
En este artículo presentamos un método visual para una rápida selección de clones de alta producción, basado en el sistema reportero mananasa. Hemos demostrado que era posible usar la actividad mananasa como una medida del nivel de expresión de la proteína de interés. Clones de destino de alta producción de la proteína fueron seleccionados de forma directa en función del tamaño de los agujeros de la hidrólisis de la placa seleccionada. A modo de ejemplo, el gen targer (ELP-hal18) se expresó y se purifica en el Pichia pastoris utilizando esta tecnología.
Conclusiones
Estamos proponiendo una nueva metodología para la obtención de clones de alta producción de proteínas de interés, basado en el sistema reportero mananasa, este sistema también podría ser posible adaptar a otros microorganismos, tales como Saccharomy. Cervesae,
Tomado de:
A visual method for direct selection of high-producing Pichia pastoris clones
Fan Hu , Xin Li , Jie Lu , Pei Hong Mao , Xiang Jin , Ben Rao , Peng Zheng , Yu Lin Zhou , Sheng Yi Liu , Tao Ke , Xiang Dong Ma and Li Xin Ma
BMC Biotechnology 2011, 11:23doi:10.1186/1472-6750-11-23
Published: 21 March 2011
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