Un conjunto de vectores de promotor doble para la clonación de alto rendimiento, detección, y la expresión de proteínas en sistemas eucariotas y procariotas a partir de un único plásmido
autores: Namita Sinah, Charlotte A. Williams, Robert C. Piper y S. Brookhart Escudos
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: BMC Biotecnología 2012, 12:54 doi: 10.1186/1472-6750-12-54
La capacidad de producir la proteína recombinante mismo en células tanto procariotas como eucariotas ofrece muchas oportunidades de experimentación. Sin embargo, la clonación del gen de la misma en múltiples plásmidos se requiere, que consume tiempo, es laborioso y todavía no pueden producir la proteína soluble, estable en cantidades suficientes. Hemos desarrollado un conjunto de vectores de expresión que permite la ligadura independiente de clonación y cribado funcional rápido para la expresión de proteínas en ambos E. coli y S. cerevisiae.
Resultados
Un conjunto de vectores de expresión se hizo que pueden expresar el mismo marco de lectura abierto en E. coli (a través del promotor del fago T7) y en S. cerevisiae (a través del promotor CUP1 o MET25). Estos plásmidos también contienen los elementos esenciales para la replicación y selección en ambos tipos celulares y tienen varias ventajas: permiten la clonación de genes por recombinación homóloga en la levadura, la expresión de proteínas se puede determinar antes del aislamiento del plásmido y secuenciación, y es una etiqueta de fusión a GST añadido para ayudar en la expresión soluble y purificación. También se ha incluido un sitio de reconocimiento de TEV que permite la escisión específica de las proteínas de fusión para producir proteínas nativas.
Conclusiones
Los vectores de promotor doble se puede usar para la clonación rápida, expresión y purificación de las proteínas objetivo de ambos sistemas procariotas y eucariotas con la capacidad de estudiar las modificaciones post-traducción.
ver mas en: http://www.biomedcentral.com/1472-6750/12/54/abstract
tomado de BMC biotecnologia
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