Los anticuerpos de la demanda: Un método rápido para la producción de scFvs humano con una mínima cantidad de antígeno
Babel Ingrid, Barderas Rodrigo, Alberto Peláez-García y J. Ignacio Casal
Resultados
Babel Ingrid, Barderas Rodrigo, Alberto Peláez-García y J. Ignacio Casal
BMC Biotecnología 2011, 11:61 doi: 10.1186/1472-6750-11-61
Antecedentes
Los anticuerpos constituyen una poderosa herramienta para estudiar la función de la proteína, localización de la proteína y las interacciones proteína-proteína, así como para fines diagnósticos y terapéuticos. El desarrollo de alto rendimiento más rápido de anticuerpos requiere metodologías con el consumo de antígeno menor.Resultados
A continuación, se describe una nueva metodología para seleccionar los anticuerpos monoclonales recombinantes mediante la combinación de la expresión in vitro de la proteína, las bibliotecas de fagos pantalla anticuerpo y microarrays del anticuerpo. La aplicación de esta combinación de metodologías que nos permite generar humanos fragmentos variables de cadena simple (scFvs) contra dos proteínas: la proteína verde fluorescente (GFP) y tiorredoxina (Trx) en poco tiempo, con tan sólo 5 ug de proteína purificada. Estos scFvs mostró reactividad específica contra sus respectivos objetivos y trabajó bien en condiciones diferentes: ELISA, Western blot e inmunofluorescencia. El scFvs fueron capaces de reconocer tan bajo como 31 ng de proteína de sus respectivos objetivos por western blot.
Conclusión Este trabajo describe una metodología novedosa y en miniatura para obtener los anticuerpos monoclonal recombinante contra cualquier objetivo en menos tiempo que otras metodologías con sólo 5 ug de proteína. El protocolo podría ser fácilmente adaptado a un procedimiento de alto rendimiento para la producción de anticuerpos.
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